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液相色譜在藥物分析的應用

更新時間:2019-12-02      點擊次數:2173

不(bu)受分(fen)析對象揮發性和熱穩定(ding)性的限(xian)制,因而彌補了氣相(xiang)(xiang)色(se)譜法的不(bu)足。在目(mu)前已知的有機化合物中,可用(yong)氣相(xiang)(xiang)色(se)譜分(fen)析的約占(zhan)20%,而80%則需(xu)用(yong)液相(xiang)(xiang)色(se)譜來(lai)分(fen)析。液相(xiang)(xiang)色(se)譜已經廣泛應(ying)用(yong)于藥物的含量(liang)測定(ding)、組成分(fen)析、質量(liang)控制等方面。近年來(lai) 液相(xiang)(xiang)色(se)譜在藥物分(fen)析的應(ying)用(yong) 中占(zhan)主要(yao)地位。

 

液相色譜在天(tian)然藥物及復方成藥分析中(zhong)的(de)應用

 

ELSD能夠(gou)(gou)測(ce)(ce)(ce)定沒有紫外(wai)吸(xi)收或(huo)為(wei)(wei)紫外(wai)末端弱吸(xi)收的(de)(de)(de)樣品,天(tian)(tian)然(ran)產物(wu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)許多成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)無(wu)疑找到了直接、準確的(de)(de)(de)測(ce)(ce)(ce)定方(fang)法(fa)。ELSD在天(tian)(tian)然(ran)產物(wu)及其復方(fang)成(cheng)(cheng)藥分(fen)(fen)析(xi)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)應用(yong)(yong)(yong)報道主要(yao)(yao)(yao)有皂(zao)(zao)(zao)(zao)苷(gan)(gan)(gan)類(lei)(lei)(lei)、生(sheng)物(wu)堿(jian)(jian)(jian)類(lei)(lei)(lei)、萜(tie)類(lei)(lei)(lei)內(nei)(nei)酯(zhi)等(deng)。皂(zao)(zao)(zao)(zao)苷(gan)(gan)(gan)無(wu)紫外(wai)吸(xi)收或(huo)僅(jin)為(wei)(wei)末端吸(xi)收,ELSD能夠(gou)(gou)對其不經(jing)衍生(sheng)進行檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce),在HPLC—ELSD的(de)(de)(de)應用(yong)(yong)(yong)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)這(zhe)方(fang)面的(de)(de)(de)報道zui多。主要(yao)(yao)(yao)有一(yi)(yi)次性(xing)(xing)分(fen)(fen)離分(fen)(fen)析(xi)天(tian)(tian)然(ran)人(ren)(ren)參(can)(can)、生(sheng)脈散復方(fang)、育精(jing)膠囊(nang)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)多種人(ren)(ren)參(can)(can)皂(zao)(zao)(zao)(zao)苷(gan)(gan)(gan);西洋參(can)(can)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)人(ren)(ren)參(can)(can)皂(zao)(zao)(zao)(zao)苷(gan)(gan)(gan)和(he)(he)(he)擬人(ren)(ren)參(can)(can)皂(zao)(zao)(zao)(zao)苷(gan)(gan)(gan)定量測(ce)(ce)(ce)定;三七中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)三七皂(zao)(zao)(zao)(zao)苷(gan)(gan)(gan)的(de)(de)(de)含量分(fen)(fen)析(xi);黃芪(qi)(qi)、黃芪(qi)(qi)注(zhu)射液和(he)(he)(he)保(bao)元湯中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)黃芪(qi)(qi)皂(zao)(zao)(zao)(zao)苷(gan)(gan)(gan)、黃芪(qi)(qi)甲甙(dai)(dai)的(de)(de)(de)分(fen)(fen)離和(he)(he)(he)測(ce)(ce)(ce)定;麥冬中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)甾(zai)體(ti)皂(zao)(zao)(zao)(zao)甙(dai)(dai)元;天(tian)(tian)麻中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)天(tian)(tian)麻甙(dai)(dai)的(de)(de)(de)含量測(ce)(ce)(ce)定等(deng)。這(zhe)些(xie)(xie)研究主要(yao)(yao)(yao)采(cai)用(yong)(yong)(yong)Cl8柱(zhu)、乙晴與水作流動相(xiang),不經(jing)衍生(sheng)直接測(ce)(ce)(ce)定多組分(fen)(fen)含量,結(jie)果顯示方(fang)法(fa)靈(ling)敏(min)度(du)高(一(yi)(yi)般檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)限低于(yu)(yu)3μg/m1)、線性(xing)(xing)關系良(liang)好(hao)。對于(yu)(yu)無(wu)紫外(wai)吸(xi)收的(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)堿(jian)(jian)(jian)類(lei)(lei)(lei)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen),ELSD同樣顯示出操作簡單、靈(ling)敏(min)度(du)高的(de)(de)(de)優點。對比HPLC—UV法(fa)測(ce)(ce)(ce)定貝(bei)母中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)甾(zai)類(lei)(lei)(lei)貝(bei)母生(sheng)物(wu)堿(jian)(jian)(jian),采(cai)用(yong)(yong)(yong)ELSD檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)器(qi),不但不需(xu)衍生(sheng)化(hua)操作,提(ti)高了結(jie)果的(de)(de)(de)準確度(du),而且可檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)出不含雙鍵的(de)(de)(de)貝(bei)母甲素,對動物(wu)體(ti)內(nei)(nei)的(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)堿(jian)(jian)(jian)類(lei)(lei)(lei)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)如河豚du素,無(wu)紫外(wai)吸(xi)收且安全性(xing)(xing)低,不適(shi)合衍生(sheng)化(hua)法(fa),可用(yong)(yong)(yong)ELSD法(fa)進行檢(jian)(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce),獲得滿意結(jie)果。銀杏作為(wei)(wei)一(yi)(yi)種保(bao)健(jian)藥品,其主要(yao)(yao)(yao)活性(xing)(xing)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)為(wei)(wei)黃酮類(lei)(lei)(lei)和(he)(he)(he)萜(tie)類(lei)(lei)(lei)內(nei)(nei)酯(zhi),以往(wang)銀杏中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)萜(tie)類(lei)(lei)(lei)內(nei)(nei)酯(zhi)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)主要(yao)(yao)(yao)采(cai)用(yong)(yong)(yong)HPLC—UV法(fa)和(he)(he)(he)HPLC—RI測(ce)(ce)(ce)定,但由于(yu)(yu)萜(tie)類(lei)(lei)(lei)內(nei)(nei)酯(zhi)紫外(wai)吸(xi)收差(cha),又含少(shao)量物(wu)質的(de)(de)(de)干擾,結(jie)果穩定性(xing)(xing)和(he)(he)(he)準確性(xing)(xing)較(jiao)差(cha)。隨著ELSD的(de)(de)(de)發展和(he)(he)(he)普及,這(zhe)些(xie)(xie)方(fang)法(fa)已經(jing)逐漸被ELSD法(fa)所取代。

 

液相(xiang)色譜(pu)在抗生素分析(xi)中(zhong)的應用

 

生產(chan)(chan)(chan)抗生素(su)時,首先要了(le)解(jie)發酵液(ye)中的(de)(de)主(zhu)體與付產(chan)(chan)(chan)物(wu)的(de)(de)存在情(qing)況。例(li)如:青霉(mei)素(su)、四(si)環素(su)、頭孢子(zi)菌素(su)、紅(hong)霉(mei)素(su)、柔紅(hong)霉(mei)素(su)、慶大(da)霉(mei)素(su)等的(de)(de)發酵產(chan)(chan)(chan)物(wu),均(jun)可(ke)用C18柱和甲醇及(ji)(ji)緩沖液(ye)配制的(de)(de)流動(dong)相(xiang)或用離子(zi)對法,分析主(zhu)體及(ji)(ji)其收產(chan)(chan)(chan)物(wu)的(de)(de)含(han)(han)量(liang)。對普魯卡因酰胺、茶堿等可(ke)進行主(zhu)體含(han)(han)量(liang)的(de)(de)測(ce)(ce)定,對xiao酸甘油可(ke)測(ce)(ce)定主(zhu)體含(han)(han)量(liang)及(ji)(ji)其降解(jie)產(chan)(chan)(chan)物(wu),以便保(bao)證藥物(wu)的(de)(de)熱量(liang)。

 

液相色譜作(zuo)為常(chang)規分析(xi)(xi)方法在藥物分析(xi)(xi)中的(de)應用

 

液相(xiang)(xiang)色譜(pu)(pu)(pu)法(fa)(fa)(fa)作為藥(yao)物(wu)(wu)(wu)分(fen)析中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)zui主(zhu)要(yao)的(de)(de)(de)(de)(de)分(fen)析方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa),常被作為常規分(fen)析和(he)檢驗(yan)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)。近年來在(zai)這(zhe)個(ge)方(fang)(fang)面的(de)(de)(de)(de)(de)研(yan)(yan)究比較多(duo),劉樹業(ye)等為時刻監(jian)控治療(liao)肝癌時的(de)(de)(de)(de)(de)抗癌藥(yao)物(wu)(wu)(wu)劑(ji)量即血(xue)中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)濃度(du)(du)(du),提高療(liao)效(xiao),減(jian)少副作用(yong),采(cai)用(yong)紫外-HPLC法(fa)(fa)(fa)對血(xue)中(zhong)(zhong)和(he)組織中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)阿霉素濃度(du)(du)(du)進(jin)行(xing)(xing)分(fen)析。用(yong)UV-240紫外分(fen)光(guang)光(guang)度(du)(du)(du)計,BECKMAN332型液相(xiang)(xiang)色譜(pu)(pu)(pu)儀,采(cai)用(yong)反向色譜(pu)(pu)(pu)法(fa)(fa)(fa)。針對近幾年奧委會(hui)醫學委員(yuan)會(hui)公布的(de)(de)(de)(de)(de)禁用(yong)表中(zhong)(zhong)新(xin)增(zeng)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)及一系列(lie)利(li)尿劑(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)相(xiang)(xiang)關化(hua)合物(wu)(wu)(wu)進(jin)行(xing)(xing)了研(yan)(yan)究,比較了不同的(de)(de)(de)(de)(de)提取(qu)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)及回收(shou)率,研(yan)(yan)究了幾種(zhong)藥(yao)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)排泄情況;建立(li)了同時分(fen)析13種(zhong)利(li)尿劑(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)液相(xiang)(xiang)色譜(pu)(pu)(pu)測定方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa),檢出限小于5ng。用(yong)0.02mol/L的(de)(de)(de)(de)(de)三羥甲(jia)基(ji)胺基(ji)甲(jia)烷(用(yong)磷酸調pH值(zhi)至(zhi)7)和(he)甲(jia)醇(chun)(含(han)2%乙酸和(he)0.25%庚烷磺(huang)酸鈉(na))作流動相(xiang)(xiang)進(jin)行(xing)(xing)梯度(du)(du)(du)洗脫,建立(li)了脂性油膏藥(yao)物(wu)(wu)(wu)中(zhong)(zhong)黃芩甙含(han)量的(de)(de)(de)(de)(de)反相(xiang)(xiang)液相(xiang)(xiang)色譜(pu)(pu)(pu)分(fen)析方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa),本法(fa)(fa)(fa)分(fen)析速度(du)(du)(du)快(kuai),重現性好,黃芩甙的(de)(de)(de)(de)(de)平(ping)均(jun)回收(shou)率為103.7%。

 

液(ye)相(xiang)色(se)譜在藥(yao)物殘(can)留測(ce)定上的應用

 

由于(yu)(yu)液(ye)(ye)(ye)(ye)相(xiang)(xiang)色(se)(se)(se)譜(pu)能夠對含量(liang)復(fu)雜組分(fen)進(jin)行(xing)(xing)定(ding)(ding)(ding)量(liang)分(fen)析,被(bei)廣(guang)泛(fan)使用(yong)于(yu)(yu)藥(yao)物(wu)殘(can)(can)留的(de)(de)(de)測(ce)(ce)(ce)(ce)定(ding)(ding)(ding)上。以(yi)(yi)液(ye)(ye)(ye)(ye)相(xiang)(xiang)色(se)(se)(se)譜(pu)法(fa)(fa)(fa)建立了豬(zhu)、羊(yang)、雞肝組織(zhi)中西(xi)wei因殘(can)(can)留量(liang)的(de)(de)(de)檢測(ce)(ce)(ce)(ce)方(fang)法(fa)(fa)(fa)。采(cai)用(yong)ODS色(se)(se)(se)譜(pu)柱(zhu),二(er)極管陣列檢測(ce)(ce)(ce)(ce)器,甲醇(chun)/水(65/35)為(wei)流(liu)動相(xiang)(xiang),222nm檢測(ce)(ce)(ce)(ce)波長下進(jin)行(xing)(xing)檢測(ce)(ce)(ce)(ce)。西(xi)wei因對照品(pin)(pin)(pin)(pin)溶液(ye)(ye)(ye)(ye)的(de)(de)(de)zui低檢測(ce)(ce)(ce)(ce)限為(wei)0.1mg/L,線性范(fan)圍(wei)為(wei)0.1~20mg/L,標(biao)準曲線回(hui)(hui)歸方(fang)程為(wei):y=-22459.83+454684.31x,線性關系良好(r=0.9999)。樣(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)以(yi)(yi)乙腈提取,并(bing)加入無(wu)水硫(liu)酸鈉和正(zheng)已烷,過濾后去(qu)除雜質,乙腈層在(zai)(zai)45~50℃下水浴氮氣(qi)吹(chui)干(gan),殘(can)(can)渣用(yong)甲醇(chun)溶解后,進(jin)樣(yang)分(fen)析。平均(jun)(jun)回(hui)(hui)收率(lv)均(jun)(jun)大(da)于(yu)(yu)80%,日間和日內變異系數均(jun)(jun)小于(yu)(yu)10%。符(fu)合(he)藥(yao)物(wu)殘(can)(can)留痕(hen)量(liang)分(fen)析要(yao)求。研(yan)究了動物(wu)源性食(shi)品(pin)(pin)(pin)(pin)中甲氧芐胺嘧啶(ding)藥(yao)物(wu)殘(can)(can)留的(de)(de)(de)提取、凈化(hua)和液(ye)(ye)(ye)(ye)相(xiang)(xiang)色(se)(se)(se)譜(pu)分(fen)析條件(jian),建立了液(ye)(ye)(ye)(ye)相(xiang)(xiang)色(se)(se)(se)譜(pu)法(fa)(fa)(fa)測(ce)(ce)(ce)(ce)定(ding)(ding)(ding)動物(wu)性食(shi)品(pin)(pin)(pin)(pin)中甲氧芐胺嘧啶(ding)藥(yao)物(wu)殘(can)(can)留的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)(fa),該(gai)法(fa)(fa)(fa)檢測(ce)(ce)(ce)(ce)限0.025mg/kg,回(hui)(hui)收率(lv)為(wei)84%~98%。此外,在(zai)(zai)人(ren)血(xue)中藥(yao)物(wu)含量(liang)的(de)(de)(de)測(ce)(ce)(ce)(ce)定(ding)(ding)(ding)中也有很多的(de)(de)(de)應用(yong)。建立了血(xue)漿及(ji)(ji)尿液(ye)(ye)(ye)(ye)中異煙jing的(de)(de)(de)液(ye)(ye)(ye)(ye)相(xiang)(xiang)色(se)(se)(se)譜(pu)快速測(ce)(ce)(ce)(ce)定(ding)(ding)(ding)方(fang)法(fa)(fa)(fa),以(yi)(yi)滿(man)足臨床藥(yao)物(wu)分(fen)析和法(fa)(fa)(fa)醫學鑒定(ding)(ding)(ding)的(de)(de)(de)需要(yao),提高對血(xue)漿及(ji)(ji)尿液(ye)(ye)(ye)(ye)中異煙jing濃度(du)檢測(ce)(ce)(ce)(ce)的(de)(de)(de)準確(que)性。以(yi)(yi)香草(cao)醛(quan)為(wei)衍(yan)生化(hua)試(shi)劑,將異煙jing經柱(zhu)前(qian)衍(yan)生為(wei)異煙jing香草(cao)醛(quan)腙,直(zhi)接對處理后樣(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)中的(de)(de)(de)腙進(jin)行(xing)(xing)定(ding)(ding)(ding)性、定(ding)(ding)(ding)量(liang)分(fen)析。以(yi)(yi)在(zai)(zai)空(kong)白人(ren)體(ti)液(ye)(ye)(ye)(ye)樣(yang)本中定(ding)(ding)(ding)量(liang)添加標(biao)準異煙jing的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)(fa)考察了樣(yang)品(pin)(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)前(qian)處理方(fang)法(fa)(fa)(fa)、儀器條件(jian)、線性范(fan)圍(wei)、精密度(du)、回(hui)(hui)收率(lv)等,并(bing)對健康受試(shi)者(zhe)血(xue)液(ye)(ye)(ye)(ye)中的(de)(de)(de)異煙jing濃度(du)進(jin)行(xing)(xing)了監測(ce)(ce)(ce)(ce)。

 

液相色譜法由于(yu)分(fen)(fen)析速(su)度(du)快(kuai)、分(fen)(fen)離效率高(gao)、檢(jian)測(ce)靈(ling)敏度(du)高(gao)、檢(jian)測(ce)自動化、適用(yong)(yong)范圍廣(guang)、組(zu)分(fen)(fen)易回收(shou)、樣品(pin)處理較簡單等優點在確定藥(yao)方(fang)案和(he)治療(liao)劑量,以及藥(yao)物動力(li)學(xue)分(fen)(fen)析和(he)藥(yao)效學(xue)評價提供了(le)方(fang)法的基礎,有著(zhu)廣(guang)泛的應用(yong)(yong)前景。

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