現代(dai)液(ye)相色(se)譜(pu)分析中，色(se)譜(pu)柱(zhu)的(de)選擇(ze)直接影響(xiang)了分離效(xiao)果的(de)好壞，選擇(ze)合適的(de)色(se)譜(pu)柱(zhu)可(ke)以縮(suo)短方法開發所需的(de)時間，并且使方法更(geng)具穩定性(xing)。

這(zhe)里為大家提供一個液相色譜柱選擇的(de)簡單思路：

1.確定(ding)(ding)分(fen)離目的(de)確定(ding)(ding)你的(de)應用(yong)是(shi)否(fou)要求高分(fen)離度(du)、短(duan)分(fen)析時間(jian)、高靈敏度(du)、長(chang)柱壽命，低的(de)實驗成本等(deng)。

2.評估分(fen)析物(wu)的化(hua)學(xue)性(xing)質評估分(fen)析物(wu)的化(hua)學(xue)性(xing)質諸如(ru)化(hua)學(xue)結構、溶解性(xing)、穩(wen)定性(xing)等。

3.選(xuan)擇合適的(de)色(se)譜柱了解(jie)色(se)譜填料的(de)物理和(he)化學性質(zhi)。

想要選適合的液相色譜(pu)柱，你(ni)需(xu)要先詳細了(le)解它。這樣(yang)才能少(shao)走冤枉(wang)路(lu)！

液相色譜柱的(de)參數——物理性質

柱長，內徑，如250*4.6mm。

長度的選擇：柱越長，總柱效越高（n值越大），柱越長，分析時間也越長。250—300mm是普遍的柱長，實驗室一半以上的工作都是采用此規格柱子，一般用來分離l0到50個組份的中等至復雜混合物；500—600mm，要求較高分辨率的應用，—般用來分離大于50個組份或包含有難分離物質的復雜樣品程序升溫分析。

內徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內徑越小柱效越高，但內徑越大，柱容量也增加，允許進樣量就越多。當進樣量超過柱容量時，則因柱內每塊理論板內不能建立真正的平衡，將會導致色譜蜂畸變，柱分辨率降低，重現性不好。因此對于復雜樣品需要準確分離，應使用小內徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就應使用內徑大的柱子，目前實驗室使用常見的柱子內徑一般是4.6mm。

一般選擇原則：分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱；對于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長色譜柱使用壽命等。

粒徑，影(ying)響(xiang)色譜分離度。

粒(li)徑(jing)越小(xiao)柱(zhu)效越高(gao)、分離(li)度越高(gao)，但同(tong)時會導致較高(gao)柱(zhu)壓降。選擇1.5-3μm的(de)填料(liao)以解決一(yi)些復(fu)雜樣品，UPLC可以使用(yong)1.5μm的(de)填料(liao)；另(ling)外10μm或更大粒(li)徑(jing)的(de)填料(liao)用(yong)作半制(zhi)備(bei)或制(zhi)備(bei)柱(zhu)。

孔徑和比表面積

孔(kong)徑，60A，120A，300A等(deng)。孔(kong)徑小(xiao)(xiao)，則含孔(kong)率(lv)高，比(bi)表面(mian)積(ji)大，載碳量高；色譜柱填(tian)料(liao)孔(kong)徑大小(xiao)(xiao)需(xu)和(he)分子(zi)大小(xiao)(xiao)相匹配，保證分子(zi)自由進出填(tian)料(liao)孔(kong)并(bing)與孔(kong)內表面(mian)的(de)鍵合相進行分離(li)分配，通常(chang)要求孔(kong)徑直(zhi)徑是分子(zi)直(zhi)徑的(de)3倍以上(shang)，一(yi)般小(xiao)(xiao)分子(zi)使用80—120A，大分子(zi)使用300A。

比表(biao)面(mian)積，指的(de)是每(mei)克填料的(de)表(biao)面(mian)積，如180m2/g—350m2/g，與(yu)粒度和含(han)孔率(lv)有關；比表(biao)面(mian)積大，會增(zeng)加樣(yang)品(pin)與(yu)鍵合(he)相(xiang)之間的(de)反(fan)應(ying)，增(zeng)加保留和分離(li)度；比表(biao)面(mian)積小(xiao)則可以縮短分析時間和平衡時間，并不(bu)是比表(biao)面(mian)積大或者小(xiao)就(jiu)更好，需要選擇合(he)適的(de)比表(biao)面(mian)積。

孔容和機(ji)械強(qiang)度(du)

孔容，又(you)稱(cheng)“孔體積(ji)(ji)”。指單(dan)位顆(ke)粒的空隙(xi)體積(ji)(ji)大(da)小。它能很好(hao)的反應填料(liao)的機械(xie)(xie)強度(du)。孔體積(ji)(ji)大(da)的填料(liao)相對孔體積(ji)(ji)小的填料(liao)機械(xie)(xie)強度(du)要略弱。孔體積(ji)(ji)為1.5mL/g或更小的填料(liao)大(da)多用于(yu)(yu)HPLC分離，而孔體積(ji)(ji)大(da)于(yu)(yu)1.5mL/g的填料(liao)使用于(yu)(yu)尺(chi)寸排阻色譜和低壓色譜。

液相色(se)譜柱(zhu)的(de)參數--化學性質

填料基質

硅膠基質：純度(du)高本錢低，強(qiang)度(du)大，化(hua)學修(xiu)(xiu)飾(shi)輕易，但pH值范圍(wei)有(you)限。大多硅膠基質填料在pH2-8之間(jian)穩定，但經過特殊修(xiu)(xiu)飾(shi)的硅膠鍵合(he)相可以穩定在pH1.5-10。

聚合物基(ji)質：應用pH值范圍寬，溫(wen)度(du)穩定（高溫(wen)可以達到80度(du)以上(shang)），機(ji)械強度(du)小。

含碳量

含(han)(han)碳量指(zhi)的(de)是(shi)硅膠(jiao)表(biao)面(mian)鍵合相(xiang)的(de)比例(li)，與(yu)比表(biao)面(mian)積和鍵合覆蓋度(du)等有關。高含(han)(han)碳量進(jin)步柱容量、分(fen)辨率及(ji)分(fen)析(xi)(xi)(xi)時(shi)間，用于要求高分(fen)離(li)度(du)的(de)復雜樣品；低含(han)(han)碳量分(fen)析(xi)(xi)(xi)時(shi)間短、展現(xian)不同的(de)選(xuan)擇(ze)性，用于快速(su)分(fen)析(xi)(xi)(xi)簡單樣品及(ji)需要高含(han)(han)水(shui)活動相(xiang)條(tiao)件的(de)樣品。一般C18的(de)含(han)(han)碳量在(zai)7-19%不等。

鍵合(he)相(xiang)

鍵合(he)試劑不同(tong)，對化合(he)物的(de)選擇性(xing)不同(tong)，一般長鏈(lian)(lian)的(de)烷基(ji)鍵合(he)相(xiang)（C18 C8）比短鏈(lian)(lian)的(de)（C4 C3）穩定；非極性(xing)的(de)鍵合(he)相(xiang)比極性(xing)的(de)鍵合(he)相(xiang)（-NH2）穩定。

封端

封(feng)端能夠(gou)降低極性堿性化合(he)物由于與裸露(lu)的硅醇基(ji)相(xiang)互作(zuo)用而產(chan)生的拖尾峰。不封(feng)端鍵(jian)合(he)相(xiang)相(xiang)對封(feng)端鍵(jian)合(he)相(xiang)會產(chan)生不同的選(xuan)擇(ze)性，尤其是極性樣(yang)品。

正相(xiang)(xiang)—反相(xiang)(xiang)色(se)譜對比

液相(xiang)(xiang)色譜柱(zhu)有正(zheng)相(xiang)(xiang)和(he)反相(xiang)(xiang)之(zhi)分。目前(qian)市場上主(zhu)(zhu)要以反相(xiang)(xiang)色譜為主(zhu)(zhu)，約占80%的比例(li)。

現在(zai)(zai)市(shi)面上的(de)(de)液相(xiang)色(se)譜(pu)(pu)(pu)柱(zhu)琳瑯滿目，了解色(se)譜(pu)(pu)(pu)柱(zhu)的(de)(de)參數可以讓我們(men)有(you)一(yi)個(ge)初步的(de)(de)選擇(ze)，但由于各個(ge)儀器廠(chang)商的(de)(de)填料技術(shu)和(he)鍵合(he)技術(shu)仍有(you)差異(yi)，即使都是(shi)C18柱(zhu)，同一(yi)品牌(pai)不同系列都有(you)不同的(de)(de)功能，有(you)能耐(nai)受低pH值的(de)(de)、有(you)耐(nai)高溫的(de)(de)、有(you)適(shi)合(he)堿性樣(yang)品的(de)(de)等等。所以在(zai)(zai)選擇(ze)色(se)譜(pu)(pu)(pu)柱(zhu)前要好好研(yan)究色(se)譜(pu)(pu)(pu)柱(zhu)參數，仔細閱讀(du)色(se)譜(pu)(pu)(pu)柱(zhu)說(shuo)明書，才能找到合(he)適(shi)的(de)(de)色(se)譜(pu)(pu)(pu)柱(zhu)和(he)適(shi)宜的(de)(de)分離方法(fa)。