大(da)環內(nei)酯(zhi)類(lei)(lei)(lei)與(yu)氯霉素類(lei)(lei)(lei)藥(yao)(yao)物(wu)是(shi)兩類(lei)(lei)(lei)應用(yong)廣(guang)泛的(de)廣(guang)普抗(kang)(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素，由(you)于(yu)這(zhe)兩類(lei)(lei)(lei)抗(kang)(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素能夠有效預防和(he)治療(liao)家(jia)畜(chu)傳染病(bing)和(he)寄生(sheng)(sheng)蟲(chong)病(bing)的(de)發生(sheng)(sheng)，有些還(huan)具有促進動(dong)物(wu)生(sheng)(sheng)長發育(yu)的(de)功用(yong)。因此(ci)，為(wei)(wei)(wei)了降低(di)養(yang)殖(zhi)成(cheng)(cheng)本，提高(gao)經濟效益，在(zai)家(jia)畜(chu)養(yang)殖(zhi)中(zhong)廣(guang)為(wei)(wei)(wei)使(shi)用(yong)。但是(shi)，近(jin)年來(lai)由(you)于(yu)在(zai)禽(qin)畜(chu)養(yang)殖(zhi)過(guo)程中(zhong)過(guo)量使(shi)用(yong)抗(kang)(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素又(you)不(bu)遵守休藥(yao)(yao)期的(de)規(gui)定(ding)(ding)，在(zai)牛羊肉、豬肉以(yi)及(ji)(ji)雞鴨魚肉中(zhong)檢測出了各(ge)種抗(kang)(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素。這(zhe)種殘留(liu)(liu)可以(yi)通過(guo)食(shi)物(wu)鏈進入人(ren)(ren)體(ti)，進而對(dui)人(ren)(ren)體(ti)造成(cheng)(cheng)各(ge)種危(wei)害。紅(hong)霉素、泰樂菌(jun)(jun)素等大(da)環內(nei)酯(zhi)類(lei)(lei)(lei)可致肝損(sun)害和(he)聽覺障礙。更(geng)嚴重的(de)是(shi)長期大(da)量濫用(yong)廣(guang)譜(pu)抗(kang)(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素會(hui)導致腸道微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)菌(jun)(jun)群被(bei)抑制，使(shi)人(ren)(ren)體(ti)產(chan)生(sheng)(sheng)抗(kang)(kang)(kang)藥(yao)(yao)性，這(zhe)種抗(kang)(kang)(kang)藥(yao)(yao)性導致人(ren)(ren)類(lei)(lei)(lei)感染疾病(bing)之后治療(liao)難(nan)度(du)加(jia)大(da)，治療(liao)成(cheng)(cheng)本升高(gao)。　　為(wei)(wei)(wei)了保(bao)障人(ren)(ren)類(lei)(lei)(lei)的(de)生(sheng)(sheng)命健康，世界(jie)各(ge)國衛(wei)生(sheng)(sheng)組織以(yi)及(ji)(ji)食(shi)品藥(yao)(yao)品監(jian)督管理部門都(dou)已(yi)經將肉食(shi)品中(zhong)各(ge)種抗(kang)(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素殘留(liu)(liu)量作了嚴格(ge)規(gui)定(ding)(ding)，并且(qie)以(yi)抗(kang)(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素在(zai)肉食(shi)品中(zhong)的(de)殘留(liu)(liu)量作為(wei)(wei)(wei)產(chan)品進口(kou)的(de)貿易壁壘，如美國和(he)歐盟對(dui)阿維菌(jun)(jun)素在(zai)肉食(shi)品中(zhong)的(de)zui高(gao)殘留(liu)(liu)*為(wei)(wei)(wei)25ug/kg，泰勒(le)菌(jun)(jun)素為(wei)(wei)(wei)100ug/kg，替(ti)米考星為(wei)(wei)(wei)100ug/kg，伊(yi)維菌(jun)(jun)素為(wei)(wei)(wei)40ug/kg。目前肉食(shi)品中(zhong)大(da)環內(nei)酯(zhi)類(lei)(lei)(lei)抗(kang)(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素常用(yong)液一質(zhi)聯用(yong)進行全面(mian)分析。氯霉素類(lei)(lei)(lei)藥(yao)(yao)物(wu)常用(yong)氣相色譜(pu)及(ji)(ji)液相色譜(pu)分析。而用(yong)液相色譜(pu)法同時分析肉食(shi)品中(zhong)兩類(lei)(lei)(lei)常見抗(kang)(kang)(kang)生(sheng)(sheng)素還(huan)未見文獻(xian)報道。

   一、LC2100高壓恒流(liu)泵：2臺
      uv2100紫外檢(jian)測器：1臺 N2000色譜(pu)工作站(zhan)：1臺7725i手動進樣閥：1套(tao)

   色譜工作站：1套(tao) 

   二、LC2100液(ye)相色(se)譜(pu)儀特點

★采(cai)用世界上zui的(de)光學檢(jian)測(ce)(ce)系(xi)統（安(an)捷(jie)倫(lun)液相色譜檢(jian)測(ce)(ce)系(xi)統），交差(cha)光路(lu)設(she)計(ji)

★輸液泵(beng)單向閥(fa)來(lai)源自世(shi)界zui的輸液泵(beng)技(ji)術

★  傳承了(le)美國瓦里安技(ji)術，確(que)保了(le)泵的可靠性(xing)及(ji)穩定性(xing)

★  檢測器采用了安捷倫(lun)科技技術

★  在(zai)國內(nei)同行業(ye)真正(zheng)不需(xu)換燈(deng)，實現全波長可變檢測分析

★  智能化高，可實現網(wang)絡化平臺監控，提高了(le)你(ni)的QC效益。

★  自(zi)動化，讓你從繁鎖(suo)的(de)分析操(cao)作中解放出(chu)更多(duo)的(de)時(shi)間！

技術特點

★ 輸液(ye)泵單向閥來源自(zi)瑞士(shi)進口、密封圈來自(zi)美國*、氘(dao)燈以及氘(dao)燈電(dian)源來自(zi)德國*、管路和(he)各種接(jie)頭來源自(zi)美國*

★ 泵形(xing)式：串聯雙柱塞 浮動式密封圈(quan)；泵頭自沖洗功能，泵無須手動排空即可輸(shu)液

“自吸式單向閥(fa)"技術，可(ke)延長密封圈使用壽(shou)命；

★ 程(cheng)序化(hua)的溶劑(ji)(ji)類和壓縮因子，可自動補償；完整的預清洗功(gong)能，更于快速溶劑(ji)(ji)更換

★ 三條流(liu)量校正曲(qu)線(xian)以(yi)及*的多(duo)點參數校正，保障了*的流(liu)量準(zhun)確性； 

★ 梯度：高壓(ya)2-3元；梯度方式(shi)：高壓(ya)，梯度洗(xi)脫內部(bu)軟件可自控(kong)制(zhi)，可通(tong)過PC機及泵控(kong)制(zhi)

★ 紫外檢(jian)測器具有自動波長定位調(diao)整，自動調(diao)零，多量程輸出選擇

★  D2燈（德國原裝(zhuang)）：壽命3500小時，保(bao)證使(shi)用(yong)2000小時

  三、高壓恒流輸液泵技術參(can)數：

四(si)、紫外可(ke)見檢測(ce)器技(ji)術(shu)參數

三(san)、實驗

　　1 儀器與試劑

　京科瑞達　 LC-2100高壓恒流泵

　　uv2100紫外檢(jian)測器

　　超聲波清(qing)洗(xi)儀　　　　　　　　　　　　　

　　反(fan)相色(se)譜柱C18　　

　　固相(xiang)萃取柱(zhu)　　　　　　　　　　　　　　　

　　泰樂菌素(su)、替(ti)米考星、氯霉素(su)、氟苯尼考標準(zhun)品(pin)均為天津市(shi)科密歐化學試劑(ji)開發中心監制　

　　乙(yi)腈、正己烷均為(wei)優級(ji)純　

　　其它試劑均為分析純　

　　實驗用水均為二次蒸(zheng)餾水　

　　新鮮(xian)牛(niu)肉與雞肉均為超市所購(gou)

　　2 色譜條件　　　　　　　　　　　

　　C18反相(xiang)色(se)譜柱　

　　柱(zhu)溫(wen)25℃，流速(su)1mL/min，進樣量25uL，梯(ti)度洗(xi)脫(tuo)(tuo)條件(jian)A相(xiang)為(wei)(wei)甲醇(chun)，B相(xiang)為(wei)(wei)0.2mol/L磷酸二(er)氫鈉含10%(體積比)甲醇(chun)，調節pH為(wei)(wei)3.0，梯(ti)度洗(xi)脫(tuo)(tuo)程序：0-2min10%A，2-8min ;10%-40%A，8-9min40%-10%A，檢測波長(chang)入為(wei)(wei)275nm

　　3 標準(zhun)溶(rong)液的配(pei)制(zhi)及(ji)標準(zhun)曲線的制(zhi)備

　　分別(bie)(bie)(bie)準(zhun)確稱(cheng)取各標(biao)準(zhun)品(pin)0.01g（至0.001g），用甲(jia)醇分別(bie)(bie)(bie)溶(rong)解并定容(rong)至100mL，配制(zhi)成100mg/L標(biao)準(zhun)儲備液，于一4℃冰(bing)箱中冷(leng)藏，測定時將(jiang)各標(biao)準(zhun)溶(rong)液混合后稀(xi)釋成0.1、0.2、0.5、1.0、5.0、10.0、15.0、20.0mg/L的溶(rong)液。分別(bie)(bie)(bie)以泰樂菌素、替米考星、氯霉素、氟苯尼考峰面積為縱坐(zuo)標(biao)，質量濃度為橫坐(zuo)標(biao)繪制(zhi)標(biao)準(zhun)曲線，計算回歸方程(cheng)及相(xiang)關系數（r）。

　　4 樣(yang)品(pin)處理

　　將(jiang)(jiang)新鮮牛(niu)肉及雞肉分別勻漿后，于-18℃冰箱中保(bao)存。測定時，將(jiang)(jiang)勻漿冷凍保(bao)存的(de)牛(niu)肉與雞肉樣品于室溫下(xia)自然解凍。分別準確稱取20.0g樣品置于50mL具塞錐(zhui)形瓶中，加(jia)入20mL乙(yi)腈，超聲(sheng)10min，轉移(yi)至(zhi)離心管，以5000r/min離心10min，收(shou)集(ji)上(shang)清(qing)液(ye)，離心沉淀(dian)物用(yong)上(shang)述方法重復(fu)提取2次(ci)，合并上(shang)清(qing)液(ye)。向得到的(de)清(qing)夜中加(jia)入30mL正(zheng)己烷(wan)，用(yong)力振(zhen)蕩5min，靜(jing)置分層(ceng)，棄去(qu)上(shang)層(ceng)正(zheng)己烷(wan)層(ceng)。然后將(jiang)(jiang)溶(rong)液(ye)于40℃減壓旋轉蒸發(fa)至(zhi)約2mL，氮氣吹干后加(jia)入5mL甲醇一磷酸鹽混(hun)合液(ye)超聲(sheng)溶(rong)解抗(kang)生素，定容至(zhi)10mL。　　　

　　5樣品凈化

　　將HLB固(gu)相萃取(qu)小(xiao)柱用(yong)(yong)5mL甲醇、5mL去離子(zi)水活(huo)化(hua)后(hou)，將4得到(dao)的樣品處(chu)理液(ye)上固(gu)相萃取(qu)柱(柱流速(su)保持(chi)1滴(di)/s），用(yong)(yong)10mL蒸餾水、10mL5%甲醇水溶液(ye)淋(lin)洗固(gu)相萃取(qu)柱，再用(yong)(yong)10mL甲醇洗脫(tuo)，將洗脫(tuo)液(ye)用(yong)(yong)氮(dan)氣吹干后(hou)，加入流動相超聲定容(rong)至5mL，zui后(hou)，經0.22um濾(lv)膜過濾(lv)后(hou)進樣。　　　　

　　6方法的(de)準確(que)度、精密度、線性范(fan)圍、回收率

對于(yu)牛肉(rou)樣(yang)品分別(bie)添加0.1、0.5、1.0mg/kg 3個水平的(de)混合(he)標(biao)準(zhun)溶液，按照4與5樣(yang)品處理及凈化方法，每個水平平行測定(ding)4次(ci)，進行回(hui)收(shou)率(lv)實驗，并且(qie)以3倍信噪比分別(bie)計算泰樂菌(jun)素、替米考星、氯霉素、氟苯(ben)尼考在牛肉(rou)樣(yang)品中的(de)檢出限，在測定(ding)條件下4種藥物(wu)在0.1—20mg/L范圍內(nei)均呈(cheng)線性，線性方程與相關(guan)系數、平均回(hui)收(shou)率(lv)、相對標(biao)準(zhun)偏差見表 　

 7、實際樣品檢(jian)測

本實驗分別對(dui)10份牛(niu)(niu)肉(rou)樣(yang)品(pin)和(he)10份雞肉(rou)樣(yang)品(pin)中(zhong)(zhong)泰樂菌素(su)(su)(su)、替米考星(xing)、氯霉素(su)(su)(su)、氟(fu)苯尼考進行檢(jian)測，沒有發現牛(niu)(niu)肉(rou)樣(yang)品(pin)中(zhong)(zhong)含(han)有以上抗生(sheng)素(su)(su)(su)，但是在4份雞肉(rou)樣(yang)品(pin)中(zhong)(zhong)都不同程度檢(jian)測到了泰樂菌素(su)(su)(su)，zui高為200ug/kg，zui低為80ug/kg，平均含(han)量為120ug/kg，高于(yu)我國動物性食品(pin)中(zhong)(zhong)獸藥zui高殘留(liu)*（100ug/kg）

        我國動物(wu)(wu)性食品(pin)中(zhong)獸藥zui高(gao)(gao)(gao)殘(can)留(liu)*規定泰(tai)樂菌素(su)(su)、替米(mi)考(kao)星(xing)、氯霉素(su)(su)、氟(fu)苯(ben)尼考(kao)在(zai)(zai)肉(rou)品(pin)中(zhong)的(de)(de)zui高(gao)(gao)(gao)殘(can)留(liu)量（MRL）分別(bie)為(wei)(wei)(wei)(wei)100、75、1.5、200ug/kg，本(ben)(ben)實驗(yan)所(suo)(suo)測泰(tai)樂菌素(su)(su)、替米(mi)考(kao)星(xing)、氟(fu)苯(ben)尼考(kao)的(de)(de)檢(jian)(jian)出(chu)限(xian)分別(bie)為(wei)(wei)(wei)(wei)20、32、16ug/kg均在(zai)(zai)zui高(gao)(gao)(gao)殘(can)留(liu)*以下，符合殘(can)留(liu)檢(jian)(jian)測分析要求(qiu)。由于氯霉素(su)(su)藥物(wu)(wu)特殊(shu)性，歐盟對(dui)(dui)氯霉素(su)(su)的(de)(de)檢(jian)(jian)出(chu)限(xian)要求(qiu)為(wei)(wei)(wei)(wei)0.1ug/kg，美國FDA對(dui)(dui)氯霉素(su)(su)的(de)(de)檢(jian)(jian)出(chu)限(xian)要求(qiu)為(wei)(wei)(wei)(wei)0.3ug/kg，按照本(ben)(ben)實驗(yan)方法(fa)，氯霉素(su)(su)檢(jian)(jian)出(chu)限(xian)為(wei)(wei)(wei)(wei)19ug/kg，還未達到上的(de)(de)要求(qiu)，這(zhe)是因(yin)為(wei)(wei)(wei)(wei)提取方法(fa)和(he)所(suo)(suo)用檢(jian)(jian)測器所(suo)(suo)致(zhi)。今(jin)后(hou)應該發展更加靈敏的(de)(de)方法(fa)以提高(gao)(gao)(gao)氯霉　素(su)(su)。本(ben)(ben)實驗(yan)方法(fa)的(de)(de)平均回收率較(jiao)高(gao)(gao)(gao)（75%-87%），而且步驟(zou)簡單、操作容(rong)易、重現性較(jiao)好　相對(dui)(dui)標準偏差(cha)為(wei)(wei)(wei)(wei)1.35%-5.41%，表明(ming)方法(fa)穩定可靠。